細胞培養基的滲透壓檢測

而細胞培養基的檢測項目為生物制品廠(chǎng)家控制原材料質(zhì)量提供一定的依據，但是隨著(zhù)生物制品安全性要求的提高，其所檢內容還有待完善，就目前的檢測方法如下：

1. 澄清度檢查法
該方法依據中國藥典2010版二部附錄IX B 澄清度檢查法制定。澄清度是檢查藥品溶液的渾濁程度，即濁度，藥品溶液中如存在細微顆粒，當直射光通過(guò)溶液時(shí)，可產(chǎn)生光散射和光吸收的現象，致使溶液微顯渾濁，所以澄清度可在一定程度上反映藥品的質(zhì)量和生產(chǎn)工藝水平。水是培養基的溶劑，細胞培養基中的營(yíng)養成份只有完全溶解于水才能被細胞吸收攝取，細胞才能生長(cháng)增殖，因此培養基是否溶解以及培養液是否透明澄清直接影響培養基使用。通過(guò)對水溶解后的培養基的澄清度檢查，判斷細胞培養基的溶解性。此法是用規定級號的濁度標準溶液與供試品溶液比較，以判定細胞培養液的澄清度或其渾濁程度。

2. PH 值測定法
各種細胞的正常功能及一切生物化學(xué)反應，都是在適當和穩定的酸堿環(huán)境下進(jìn)行的，因此細胞培養基的pH值是細胞生長(cháng)的重要參數，pH值偏低或偏高都會(huì )影響細胞生長(cháng)。該法依據中國藥典2010年版二部附錄Ⅵ H pH值的測定法進(jìn)行。由于各酸度計的精度與操作方法有所不同，應嚴格按各儀器說(shuō)明書(shū)與注意事項進(jìn)行操作，并在使用之前注意校正。
在工業(yè)化使用時(shí)，由于傳統的細胞培養基中含有pH指示劑如酚紅等，通常依據“眼睛”觀(guān)察培養液顏色來(lái)判定pH，或是簡(jiǎn)單的使用pH試紙測定，但是上述方法存在較大的主觀(guān)因素，影響正確判定，并且在配制的過(guò)程中，不同區域還可能存在一定的水質(zhì)區別等，采用pH儀器檢測可以消除人的主觀(guān)因素，準確性高。此外，在檢測過(guò)程中，添加碳酸氫鈉后的培養基在測定的過(guò)程中，暴露在空氣中的時(shí)間也會(huì )對所測pH的準確性有一定的影響。

3. 干燥減量測定方法
細胞培養基具有吸濕性，在空氣中放置時(shí)水份會(huì )很快升高，干燥減量表示產(chǎn)品中的含濕量。細胞培養基是有菌制劑，其豐富的營(yíng)養成份有利于微生物生長(cháng)，保持培養基中的低水份含量可以防止微生物的繁殖。檢測細胞培養基中水份的含量采用的方法是干燥減量法。該測定方法是依據中國藥典2010年版二部附錄Ⅷ L 干燥失重測定法制定，具體是指產(chǎn)品在規定條件下干燥后所減失重量的百分率。減失的重量主要是水分、結晶水及其他揮發(fā)性物質(zhì)等。由減失的重量和取樣量計算供試品的干燥失重。

4. 滲透壓
通常動(dòng)物細胞必須生活在等滲環(huán)境中，借助K＋、Na＋維持滲透平衡。雖然大多數細胞對滲透壓具有有一定的耐受性，但是培養液滲透壓過(guò)高容易使細胞脫水萎縮，培養液滲透壓過(guò)低容易使細胞膨脹破裂，控制培養基的滲透壓范圍對于細胞培養具有重要的作用。檢測通常采用冰點(diǎn)滲透壓儀進(jìn)行，當供試品溶液的毫滲透壓摩爾濃度太大或大于儀器的測定范圍時(shí)，用適宜的溶劑稀釋至可測定的毫滲透壓摩爾濃度范圍。

5. 細菌內毒素檢測方法
細菌內毒素是許多病原性細菌所產(chǎn)生的毒素。細胞培養基中細菌內毒素過(guò)高，對生物制品的質(zhì)量如純度、引起副反應等方面有影響，而且會(huì )降低生物制品的產(chǎn)率。
細菌內毒素檢查法通常利用鱟試劑來(lái)檢測或量化由革蘭氏陰性菌產(chǎn)生的細菌內毒素，以判斷供試品中細菌內毒素的限量是否符合規定的一種方法。其檢查包括凝膠法和光度測定法，后者包括濁度法和顯色基質(zhì)法。供試品檢測時(shí)，可使用其中任何一種方法進(jìn)行試驗。通常當測的結果有爭議時(shí)，以凝膠法結果為準。

6. 微生物限度
細胞培養基不是無(wú)菌產(chǎn)品，其中的微生物在一定條件下會(huì )吸收培養基中的營(yíng)養物質(zhì)滋生繁殖，導致培養基變質(zhì)失效�？刂萍毎囵B基中細菌和霉菌，是延長(cháng)培養基有效期的方法之一，也是對生產(chǎn)企業(yè)的產(chǎn)品、原料、輔料、設備器具、工藝流程、生產(chǎn)環(huán)境和操作者的衛生狀況進(jìn)行衛生學(xué)評價(jià)的綜合依據之一，對其的檢測是非常必要的。檢測方法依據中國藥典2010年版附錄Ⅺ J 微生物限度檢查法進(jìn)行，檢查項目為細菌數、霉菌數。

7. 細胞生長(cháng)試驗
細胞在體外進(jìn)行培養時(shí)，失去了機體的調節和控制作用，因此，細胞培養液除滿(mǎn)足細胞的營(yíng)養要求外，還必須使其生存環(huán)境接近活體的環(huán)境。其中培養液及外環(huán)境的培養條件如溫度、滲透壓、酸堿度等均能影響細胞的生長(cháng)。細胞培養基的功能就是滿(mǎn)足細胞體外生長(cháng)增殖需求，因此細胞培養效果的檢驗是產(chǎn)品質(zhì)量?jì)?yōu)劣的一個(gè)直觀(guān)表述，是必檢項目，這也是一個(gè)產(chǎn)品性能特性表述的要求。
細胞培養檢測方法是：細胞在37℃恒溫條件下，在含體積分數為3%～10％小牛血清的細胞培養液中生長(cháng)72h，觀(guān)察細胞形態(tài)并進(jìn)行細胞計數；細胞生長(cháng)72h后，更換不含小牛血清的細胞培養液，繼續培養48h，觀(guān)察細胞形態(tài)并進(jìn)行細胞計數。培養過(guò)程中加血清培養主要檢測培養基的培養質(zhì)量，不加血清培養主要檢測培養基的有無(wú)毒害物質(zhì)。
細胞生長(cháng)實(shí)驗不但在使用一個(gè)新的產(chǎn)品時(shí)是必須進(jìn)行的檢測項目，在更換不同批次時(shí)，為檢測是否有批間差也必須進(jìn)行；此外，即使是同一個(gè)批次，分次購買(mǎi)時(shí)，或是存放擱置較長(cháng)時(shí)間再次使用時(shí)，也需進(jìn)行該項目檢測，以防止培養基在貯存、運輸過(guò)程中可能發(fā)生的質(zhì)量變化。